ઑસ્ટિયોઆર્થરાઇટિસ (OA) એ લાંબા ગાળાના ક્રોનિક ડીજનરેટિવ હાડકાના સાંધાના રોગોમાંનો એક છે જે 65 વર્ષથી વધુ ઉંમરના લોકોને અસર કરે છે [
1]. સામાન્ય રીતે, OA દર્દીઓમાં ક્ષતિગ્રસ્ત કોમલાસ્થિ, સોજોવાળા સાયનોવિયમ અને ક્ષતિગ્રસ્ત કોન્ડ્રોસાઇટ્સનું નિદાન થાય છે, જે પીડા અને શારીરિક તકલીફનું કારણ બને છે [
2]. સંધિવાનો દુખાવો મુખ્યત્વે સાંધામાં બળતરા દ્વારા કોમલાસ્થિના અધોગતિને કારણે થાય છે, અને જ્યારે કોમલાસ્થિને ગંભીર નુકસાન થાય છે ત્યારે હાડકાં એકબીજા સાથે અથડાઈ શકે છે જેના કારણે અસહ્ય પીડા અને શારીરિક કષ્ટ થાય છે [
3]. સાંધામાં દુખાવો, સોજો અને જડતા જેવા લક્ષણો સાથે બળતરા મધ્યસ્થીઓની સંડોવણી સારી રીતે દસ્તાવેજીકૃત છે. OA દર્દીઓમાં, બળતરા સાયટોકાઇન્સ, જે કોમલાસ્થિ અને સબકોન્ડ્રલ હાડકાના ધોવાણનું કારણ બને છે, સાયનોવિયલ પ્રવાહીમાં જોવા મળે છે [
4]. OA દર્દીઓને સામાન્ય રીતે બે મુખ્ય ફરિયાદો હોય છે: દુખાવો અને સાયનોવિયલ બળતરા. તેથી, વર્તમાન OA ઉપચારનો મુખ્ય ઉદ્દેશ્ય પીડા અને બળતરા ઘટાડવાનો છે. [
5]. જોકે ઉપલબ્ધ OA સારવાર, જેમાં નોન-સ્ટીરોઈડલ અને સ્ટીરોઈડલ દવાઓનો સમાવેશ થાય છે, તે પીડા અને બળતરા ઘટાડવામાં અસરકારક સાબિત થઈ છે, આ દવાઓના લાંબા ગાળાના ઉપયોગથી રક્તવાહિની, જઠરાંત્રિય અને કિડનીની તકલીફ જેવા ગંભીર સ્વાસ્થ્ય પરિણામો આવે છે [
6]. આમ, ઓસ્ટિઓઆર્થરાઇટિસની સારવાર માટે ઓછી આડઅસરો ધરાવતી વધુ અસરકારક દવા વિકસાવવાની જરૂર છે.
કુદરતી સ્વાસ્થ્ય ઉત્પાદનો સલામત અને સરળતાથી ઉપલબ્ધ હોવાને કારણે વધુને વધુ લોકપ્રિય થઈ રહ્યા છે [
7]. પરંપરાગત કોરિયન દવાઓએ સંધિવા સહિત અનેક બળતરા રોગો સામે અસરકારકતા સાબિત કરી છે [
8]. ઓકલેન્ડિયા લપ્પા ડીસી. તેના ઔષધીય ગુણધર્મો માટે જાણીતું છે, જેમ કે પીડાને દૂર કરવા અને પેટને શાંત કરવા માટે ક્વિના પરિભ્રમણને વધારવા, અને પરંપરાગત રીતે તેનો ઉપયોગ કુદરતી પીડાનાશક તરીકે થાય છે [
9]. અગાઉના અહેવાલો સૂચવે છે કે એ. લપ્પામાં બળતરા વિરોધી ગુણધર્મો છે [
10,
11], પીડાનાશક [
12], કેન્સર વિરોધી [
13], અને ગેસ્ટ્રોપ્રોટેક્ટીવ [
14] અસરો. એ. લપ્પાની વિવિધ જૈવિક પ્રવૃત્તિઓ તેના મુખ્ય સક્રિય સંયોજનોને કારણે થાય છે: કોસ્ટ્યુનોલાઇડ, ડિહાઇડ્રોકોસ્ટસ લેક્ટોન, ડાયહાઇડ્રોકોસ્ટ્યુનોલાઇડ, કોસ્ટુસ્લેક્ટોન, α-કોસ્ટોલ, સોસુરિયા લેક્ટોન અને કોસ્ટુસ્લેક્ટોન [
15]. અગાઉના અભ્યાસો દાવો કરે છે કે કોસ્ટ્યુનોલાઇડે લિપોપોલિસેકરાઇડ (LPS) માં બળતરા વિરોધી ગુણધર્મો દર્શાવ્યા હતા, જેણે NF-kB અને હીટ શોક પ્રોટીન માર્ગના નિયમન દ્વારા મેક્રોફેજને પ્રેરિત કર્યા હતા [
16,
17]. જોકે, કોઈ અભ્યાસમાં OA સારવાર માટે A. lappa ની સંભવિત પ્રવૃત્તિઓની તપાસ કરવામાં આવી નથી. વર્તમાન સંશોધનમાં (મોનોસોડિયમ-આયોડોએસેટેટ) MIA અને એસિટિક એસિડ-પ્રેરિત ઉંદર મોડેલોનો ઉપયોગ કરીને OA સામે A. lappa ની ઉપચારાત્મક અસરોની તપાસ કરવામાં આવી છે.
મોનોસોડિયમ-આયોડોએસિટેટ (MIA) નો ઉપયોગ પ્રાણીઓમાં OA ના મોટા ભાગના પીડા વર્તણૂકો અને પેથોફિઝીયોલોજીકલ લક્ષણો ઉત્પન્ન કરવા માટે પ્રખ્યાત છે [
18,
19,
20]. જ્યારે ઘૂંટણના સાંધામાં ઇન્જેક્ટ કરવામાં આવે છે, ત્યારે MIA કોન્ડ્રોસાઇટ ચયાપચયને અવ્યવસ્થિત કરે છે અને બળતરા અને બળતરાના લક્ષણો, જેમ કે કોમલાસ્થિ અને સબકોન્ડ્રલ હાડકાનું ધોવાણ, OA ના મુખ્ય લક્ષણો, પ્રેરે છે [
18]. એસિટિક એસિડથી પ્રેરિત લેખન પ્રતિભાવને પ્રાણીઓમાં પેરિફેરલ પીડાના સિમ્યુલેશન તરીકે વ્યાપકપણે ગણવામાં આવે છે જ્યાં બળતરા પીડાને માત્રાત્મક રીતે માપી શકાય છે [
19]. માઉસ મેક્રોફેજ સેલ લાઇન, RAW264.7, બળતરા પ્રત્યેના કોષીય પ્રતિભાવોનો અભ્યાસ કરવા માટે લોકપ્રિય રીતે ઉપયોગમાં લેવાય છે. LPS સાથે સક્રિય થવા પર, RAW264 મેક્રોફેજ બળતરા માર્ગોને સક્રિય કરે છે અને TNF-α, COX-2, IL-1β, iNOS અને IL-6 જેવા અનેક બળતરા મધ્યસ્થીઓનો સ્ત્રાવ કરે છે [
20]. આ અભ્યાસમાં MIA પ્રાણી મોડેલ, એસિટિક એસિડ-પ્રેરિત પ્રાણી મોડેલ અને LPS-સક્રિય RAW264.7 કોષોમાં OA સામે A. lappa ની એન્ટિ-નોસિસેપ્ટિવ અને એન્ટિ-ઇન્ફ્લેમેટરી અસરોનું મૂલ્યાંકન કરવામાં આવ્યું છે.
2. સામગ્રી અને પદ્ધતિઓ
૨.૧. વનસ્પતિ સામગ્રી
પ્રયોગમાં ઉપયોગમાં લેવાયેલા એ. લપ્પા ડીસી. ના સૂકા મૂળ એપુલિપ ફાર્માસ્યુટિકલ કંપની લિમિટેડ, (સિઓલ, કોરિયા) પાસેથી મેળવવામાં આવ્યા હતા. તેને ગાચોન યુનિવર્સિટીના કોરિયન મેડિસિન વિભાગના હર્બલ ફાર્માકોલોજી વિભાગના પ્રો. ડોંગહુન લી દ્વારા ઓળખવામાં આવ્યા હતા અને વાઉચરનો નમૂનો નંબર 18060301 તરીકે જમા કરાવવામાં આવ્યો હતો.
૨.૨. એ. લપ્પા અર્કનું HPLC વિશ્લેષણ
A. લપ્પાને રિફ્લક્સ ઉપકરણ (નિસ્યંદિત પાણી, 100 °C પર 3 કલાક) નો ઉપયોગ કરીને કાઢવામાં આવ્યું હતું. કાઢવામાં આવેલા દ્રાવણને ઓછા દબાણવાળા બાષ્પીભવકનો ઉપયોગ કરીને ફિલ્ટર અને ઘટ્ટ કરવામાં આવ્યું હતું. −80 °C હેઠળ ફ્રીઝ-ડ્રાયિંગ પછી A. લપ્પા અર્કનું ઉત્પાદન 44.69% હતું. A. લપ્પાનું ક્રોમેટોગ્રાફિક વિશ્લેષણ 1260 ઇન્ફિનિટીⅡ HPLC-સિસ્ટમ (એજિલેન્ટ, પાલ અલ્ટો, CA, USA) નો ઉપયોગ કરીને કનેક્ટેડ HPLC સાથે હાથ ધરવામાં આવ્યું હતું. રંગીન વિભાજન માટે, EclipseXDB C18 કોલમ (4.6 × 250 mm, 5 µm, એજિલેન્ટ) નો ઉપયોગ 35 °C પર કરવામાં આવ્યો હતો. કુલ 100 મિલિગ્રામ નમૂનાને 50% મિથેનોલના 10 મિલીમાં પાતળું કરવામાં આવ્યું હતું અને 10 મિનિટ માટે સોનિકેટેડ કરવામાં આવ્યું હતું. નમૂનાઓને 0.45 μm ના સિરીંજ ફિલ્ટર (વોટર્સ કોર્પ., મિલફોર્ડ, MA, USA) વડે ફિલ્ટર કરવામાં આવ્યા હતા. મોબાઇલ ફેઝ કમ્પોઝિશન 0.1% ફોસ્ફોરિક એસિડ (A) અને એસેટોનિટ્રાઇલ (B) હતું અને સ્તંભ નીચે મુજબ એલ્યુટ કરવામાં આવ્યો હતો: 0–60 મિનિટ, 0%; 60–65 મિનિટ, 100%; 65–67 મિનિટ, 100%; 67–72 મિનિટ, 0% દ્રાવક B જેનો પ્રવાહ દર 1.0 mL/મિનિટ હતો. 10 μL ના ઇન્જેક્શન વોલ્યુમનો ઉપયોગ કરીને 210 nm પર પ્રવાહીનું અવલોકન કરવામાં આવ્યું હતું. વિશ્લેષણ ત્રણ નકલોમાં કરવામાં આવ્યું હતું.
૨.૩. પશુ આવાસ અને વ્યવસ્થાપન
૫ અઠવાડિયાની ઉંમરના નર સ્પ્રેગ-ડોલી (SD) ઉંદરો અને ૬ અઠવાડિયાની ઉંમરના નર ICR ઉંદરો સામટાકો બાયો કોરિયા (ગ્યોંગગી-ડો, કોરિયા) પાસેથી ખરીદવામાં આવ્યા હતા. પ્રાણીઓને સતત તાપમાન (૨૨ ± ૨ °C) અને ભેજ (૫૫ ± ૧૦%) અને ૧૨/૧૨ કલાકના પ્રકાશ/અંધારા ચક્રનો ઉપયોગ કરીને રૂમમાં રાખવામાં આવ્યા હતા. પ્રયોગ શરૂ થાય તે પહેલાં પ્રાણીઓને એક અઠવાડિયાથી વધુ સમય માટે સ્થિતિથી પરિચિત કરવામાં આવ્યા હતા. પ્રાણીઓને ખોરાક અને પાણીની સંપૂર્ણ સપ્લાય હતી. ગાચોન યુનિવર્સિટી (GIACUC-R2019003) ખાતે પ્રાણીઓની સંભાળ અને સંભાળ માટેના વર્તમાન નૈતિક નિયમોનું તમામ પ્રાણીઓની પ્રાયોગિક પ્રક્રિયાઓમાં કડક પાલન કરવામાં આવ્યું હતું. આ અભ્યાસ તપાસકર્તા-અંધ અને સમાંતર અજમાયશ માટે ડિઝાઇન કરવામાં આવ્યો હતો. અમે પ્રાણી પ્રાયોગિક નૈતિકતા સમિતિના માર્ગદર્શિકા અનુસાર ઈચ્છામૃત્યુ પદ્ધતિનું પાલન કર્યું.
૨.૪. MIA ઇન્જેક્શન અને સારવાર
ઉંદરોને રેન્ડમલી 4 જૂથોમાં વિભાજિત કરવામાં આવ્યા હતા, જેમ કે શેમ, કંટ્રોલ, ઇન્ડોમેથાસિન અને એ. લપ્પા. 2% આઇસોફ્લોરેન O2 મિશ્રણથી એનેસ્થેટાઇઝ કરવામાં આવ્યા પછી, ઉંદરોને 50 μL MIA (40 mg/m; સિગ્મા-એલ્ડ્રિચ, સેન્ટ લૂઇસ, MO, USA) નો ઉપયોગ કરીને ઘૂંટણના સાંધામાં ઇન્ટ્રા-આર્ટિક્યુલરલી ઇન્જેક્ટ કરવામાં આવ્યો હતો જેથી પ્રાયોગિક OA થાય. સારવાર નીચે મુજબ હાથ ધરવામાં આવી હતી: નિયંત્રણ અને શેમ જૂથોને ફક્ત AIN-93G મૂળભૂત આહાર સાથે જાળવવામાં આવ્યા હતા. ફક્ત, ઇન્ડોમેથાસિન જૂથને AIN-93G આહારમાં સમાવિષ્ટ ઇન્ડોમેથાસિન (3 mg/kg) આપવામાં આવ્યું હતું અને A. લપ્પા 300 mg/kg જૂથને A. લપ્પા (300 mg/kg) સાથે પૂરક AIN-93G આહારમાં સોંપવામાં આવ્યું હતું. OA ઇન્ડક્શનના દિવસથી 24 દિવસ સુધી દૈનિક ધોરણે 190-210 ગ્રામ શરીરના વજન દીઠ 15-17 ગ્રામના દરે સારવાર ચાલુ રાખવામાં આવી હતી.
૨.૫. વજન વહન માપન
OA ઇન્ડક્શન પછી, ઉંદરોના પાછળના અંગોની વજન-વહન ક્ષમતા માપન શેડ્યૂલ મુજબ ઇનકેપેસિટીન્સ-મીટરટેસ્ટર600 (IITC લાઇફ સાયન્સ, વુડલેન્ડ હિલ્સ, CA, USA) સાથે કરવામાં આવ્યું. પાછળના અંગો પર વજન વિતરણની ગણતરી કરવામાં આવી: વજન-વહન ક્ષમતા (%)
